pH에 따른 유산균의 생존도 확인실험 질문입니다.

pH에 따른 유산균의 생존도 확인실험 질문입니다.

작성일 2024.04.03댓글 1건
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안녕하세요 pH에 따른 유산균의 생존율을 구해보기 위한 실험을 진행 준비중에 있는 고등학생입니다. 실험을 위한 조사를 하는 도중 몇가지 해결되지 않은 궁금한 점이 있어 전문가분들의 조언을 얻고자 질문을 하게 되었습니다.
원래는 pH조성이 다른 고체배지에 김치국물 희석액을 떨어뜨려 콜로니 수로 비교를 진행하려 하였으나, 고체배지를 만드는 과정중 멸균과정에서 필요한 장비들이 고등학교수준에서 마련이 어려워 학교에 있는 분광광도계를 이용하여 액체배지로 배양 후 흡광도의 차이로 비교를 진행하려고 계획중입니다.
배지는 MRS액체 배지를 사용할 예정이고, 일단 1차적으로 pH농도별 생존도를 관찰하기 적합한 유산균의 희석배수를 알아내기 위하여 희석배수에 따른 흡광도 차이로 적절한 희석배수를 알아내려고 하였는데요, 생각해보니 희석배수가 낮은 용액은 흡광도나 낮고 희석배수가 높은것은 흡광도가 높을 것 같아 대조군을 어떻게 설정해야할지를 모르겠습니다. 균이 배양되지 않은 같은 희석배수의 배지와 비교하면 될 것 같긴 하지만 적절한것을 찾는 기준도 애매해서 고민이 됩니다.
두번째는 액체배지에 유산균을 배양하고 흡광도로 생종율을 구분하는 것이 가능한지에 대한 여부 입니다. 제 생각으로는 유산균 수가 많을 수록 액체배지가 탁할것이고 그 차이로 구분할 수 있을것이라고 생각하는데 제 생각이 옳은지 모르겠습니다.
세번째는 10배수 희석법에 대한 것 입니다. 10배수 희석법을 보니 버퍼라는 용액으로 희석액을 만들던데 증류수로 대체 가능 한가요? 버퍼의 역할이 무엇인지 궁금합니다.
마지막으로 액체배지 배양방법에 관한 이야기 입니다. 액체배지 배양 방법에 대해서 많이 찾아 봤지만 딱히 정해진 방법이 없는것같아 보여 희석액을 배지에 1ml씩 접종하여 진행하려고 하는데 이렇게 배양해도 괜찮을까요?
제가 조장이라 방법을 고안해내고 준비물도 찾고 했는데 아직 미해결인 부분이 많아 팀원에게 미안하네요ㅠㅠ 도움이 필요합니다 선생님드류ㅠㅠ


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profile_image 익명 작성일 -

생명과학연구원입니다

일단 pH에 의한 유산균의 생장을 흡광도로 확인하겠다고 하신건데요 흡광도가 증가한다는 것은 배지에 균이 잘자랐다는 간접적인 증거입니다(=무슨균인지는 알 수 없습니다)

실험의 약점은 둘째치고 일단 실험만보면 액체배지도 멸균된 제품 사셔야 합니다. pH가 변인인데 Hcl나 NaOH 희석액을 준비하여 넣어주어야 합니다.

이것도 실험전 배지양과 동일한 배지에 얼마를 넣으면 pH가 얼마인지 확인해놓아야 합니다. 그래야 pH,별 생장을 구별할 수 있습니다

그리고 희석액도 멸균이 되어 있어야 합니다(균실험은 무조건 멸균 조건). 아무런 희석액과 섞으면 희석액에 잇던 균들이 더 잘 자랄 수 있습니다

그리고 배지에 접종할때에 국물은 잘 흔들어서 꼭 동일한 양을 넣어주어야 합니다

그리고 흡광도 측정시 보정을 해야하는데 김치국물의 고추가루 성분들도 영향을 주기 때문에 측정전에 김치국물과 배지를 섞어서 측정하여 영점을 잡은 후 배양액을 측정해야합니다

희석은 멸균된 증류수나 버퍼로 합니다. 버퍼란 일정 pH와 전해질 농도를 가져서 세포들이 터지지 않게 해주는 용액입니다. 균을 오래 담가놀 것이 아니기때문에 증류수로 희석해도 무방하지만 이역시도 멸균이어야 합니다

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