대장균 형질전환 실험 하는방법좀여 ㅜㅜ

중고등학생쯤 되시는거 같은데, 중고등학교 수준에서 할 수 있는 실험이 아닙니다.

일단 실험내용 자체가 약간 어렵고, 실험에 필요한 재료 및 장비도 많이 필요하기 때문입니다.

가급적이면 연구주제를 바꾸는 걸 권장해드립니다.

 

굳이, 꼭 대장균 형질전환 실험을 해야되겠다고 한다면..

대학교 생물학과에서 미생물을 연구하는 연구실에 문의하여

실험비용을 지불하고 연구실의 장비를 이용하여 실험해야합니다.

 

일단 준비물과 과정을 간단하게 알려드릴게요.

 

(1) 재료 및 장비(materials and equipments)

재료: 삽입할 유전자를 포함한 유전체(지놈)을 가진 대장균, 형질전환할 대장균, LB broth, screening plate,

primer, Taq polymerase, Taq buffer, dNTP, agarose gel, gel extraction kit, restriction enzyme and its buffer, ligase and its buffer, e-tube, pippet tip 등..

장비: 마이크로피펫, 진탕배양기, 초고속원심분리기, PCR machine, incubator, water bath 등..

 

(2) 방법(method)

1. 삽입할 유전자가 포함되어있는 유전체(genome)를 가진 대장균을 진탕배양기에서 배양

2. 배양액을 원심분리하여 세균을 얻은 뒤 genomic DNA를 추출한다.

3. 삽입할 유전자만을 복제하기 위해 프라이머(primer)를 설계하고, 합성업체에 의뢰하여 배송받음

4. primer와 genomic DNA, Taq DNA 중합효소, buffer, dNTP를 넣고 PCT machine에서 복제

5. 전기영동을 통해 복제된 유전자만 분리한 다음 gel extraction kit을 이용해 정제한다.

6. 벡터로 이용할 플라스미드를 가지고 있는 대장균을 진탕배양기에서 배양

7. 배양액을 원심분리하여 세균을 얻은 뒤 플라스미드 DNA를 추출한다.

8. 플라스미드 DNA에 제한효소를 처리하여 인큐베이터에 넣는다.

9. 잘려진 플라스미드 DNA와 삽입할 유전자 DNA에 리가아제(ligase)를 처리한다.

10. 전기영동을 통해 정제한다

11. 형질전환할 대장균을 competent cell(형질전환하기 좋은 상태의 세포)로 만든다.

12. competent cell에 10번에서 얻은 플라스미드를 넣고 42도의 물에 60~90초간 넣었다가 바로 얼음물로 식힌다.

13. 선택배지(스크리닝 배지)에 넣고 키운다.

 

 

위와 같은 과정으로 실험하게 되며, 실험 비용은 수십만원 정도 듭니다(장비사용료는 별개로..)

위의 모든 실험과정 처음부터 하려고 하면 거의 2~3주 이상은 걸리고, 처음 실험해보는 사람이면 실험 망해서 두달 세달씩 걸릴 수도 있습니다. 형질전환을 자주 하는 실험실이라면 대부분의 과정이 미리 준비되어있기 때문에 숙달된 사람과 함께 하면 1주일 내에 마칠 수도 있습니다.

 

 

그리고 질문이 매우 잘못되었는데요,

항생제 내성 형질전환, 형광물질 형질전환은 틀린 말입니다.

(형광물질 형질전환이라는 말을 직역하면 형광물질이라는 이름의 세균에 플라스미드를 넣어서 그 세균의 형질을 바꾼다는 의미가 됩니다.....)

항생제 내성이 있는 개체로의 형질전환, 또는 항생제 내성 유전자를 가진 벡터를 이용한 스크리닝 방법을 사용한 형질전환, 등과 같이 의미를 명확하게 할 수 있는 표현을 써야 합니다.