전기영동이 실패한 이유가 무엇일까요? ㅠ

전기영동이 실패한 이유가 무엇일까요? ㅠ

작성일 2012.04.03댓글 2건
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 안녕하세요


 pcr한 DNA를 아가로즈 겔에 전기영동한 사진입니다. A는 다른조 이고 B가 저희 조 인데,

과정을 똑같이 하고, EtBr도 겔이 넣고, loding dye도 섞었는데

B처럼 size maker와 DNA의 모습이 나타나지 않았어요.

 

1. Size maker의 경우 로딩할 때 양을 좀 적게 했는데 그래서 안보이는 걸 수도 있나요?

2. DNA가 안보이는 이유는 PCR 실험할 때 섞는걸 잘 못 섞어서 그런건가요??

3. 이런 결과가 나왔을 때 잘 나오게 할 수 있는 방법은 없나요?

ㅠㅠ

 

4. A의 경우 실험결과 해석할 때 '4개의 DNA가 같은 위치에 있는 것으로 보아, 같은 속도로 이동하였기 때문에 PCR실험이 잘되었다, '로 결론 지을수 있나요?



profile_image 익명 작성일 -

Loading dye가 전체적으로 흐리게 나오는 것과 DNA를 loading한 장소를 봐서는 
아마도 아가로스 젤 자체에 문제가 있는건 아닌지 의심이 됩니다. 

1. 그렇지는 않습니다. 잘 보면 size marker뿐만 아니라, DNA loading쪽에서도 희미하게 나오는 것으로
    봐서는 전체적인 문제가 있는 듯 보이네요. 

2. PCR이 제대로 안되어서 그럴 수도 있습니다. 잘 못 섞은 것이 아니라 오히려 제대로 안 섞였을 수도 
   있는 것이고, 또한 loading dye에 문제가 있다면 그럴 수도 있죠.

   또한, EtBr를 너무 적게 넣어도 그렇기도 하구요. 

   PCR에서는 전체적인 조화(?)가 중요합니다. 

3. 한가지 방법은 UV로 확인 하는 것이 아니라, 아가로스젤을 확인하는 다른 기기들을 이용해서 
    확인하는 방법도 있긴 하죠. 아마 그런 장비는 없을 듯 하네요. 

4. 잘 되었다고 말하기는 힘듭니다. 물론, 4개의 샘플이 다 똑같은 것이라면 그렇게 이야기를 해도 
    되지만, 사실 DNA가 같은 위치에 있다는건 같은 크기의 DNA 이라는 말과 같은 것이기에 
   잘 되었다라고 특정지어서 말하기는 힘들 것입니다. 
 
   전기영동의 목적은 DNA조각을 크기별로 나누는 일이니깐요. 같은 크기의 피자조각이 있다고 
   그 피자가 맛있다거나 잘 되었다고 말하기는 힘든 것이죠. ^^ 

profile_image 익명 작성일 -

우선 B조

UV를 찍었는데 아무것도 없죠 EtBr 처리가 안되었거나 DNA가 없다는 뜻입니다

EtBr을 똑같이 넣었다고 하시니 PCR과정 중 실수가 있었겠네요 프라이머를 안넣거나 버퍼오류 등등

DNA 증폭이 안되어 사실상 DNA양이 없다고 생각되네요

 

1. 사이즈마커 양이 적던많던 아예 안찍혔습니다. 위에 말한 오류입니다.

2. 네 그런것같네요 위에 말한 설명입니다

3. 실험은 사람 손을 탄다고 할 정도로 똑같이해도 누가하면 잘되고 누가하면 안되고 이런다네요

반복해보세요 실수한 과정이 있을 가능성이 큽니다

4. PCR실험이 잘된게 아니라 전기영동이 잘되었다고 해야합니다. PCR은 DNA양을 증폭시킬뿐이죠

저렇게 사이즈별로 밴드가 생기고 하는 것은 전기영동입니다.

A조는 실험이 성공하였습니다.

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