primer 제작시 제한효소부위외에 추가해주는 부분은 무엇인가요?
제한효소의 효율을 증가시키기 위해 primer의 앞이나 뒤에
서열을 추가시켜준다고 하는데
이에 대해 각 제한효소마다 선호되는 서열이 나와있는 사이트 알려주세요
또 이 추가해주는 부분이 어떤 원리에 의해 제한효소의 효율을 증대시켜주는건가요?
익명 작성일 -
제한효소의 효율을 증가시키기위해 primer의 5'앞쪽에 제한효소가 자르는 인식서열을 덧붙여 주는 것을 말하는 것 같아요. 그러면 내가 원하는 증식된 DNA 이중가닥 앞뒤쪽에 제한효소 인식자리가 존재해 제한효소로 절단한후 이것을 벡터에 붙이기 편하게 할 수 있어요.
이방법을 응용해 증식한 DNA 서열의 5' 앞쪽과 3' 뒤쪽을 서로 다른 제한효소 인식자리를 만들면, 벡터에 ligation 할때 방향을 조절할수 있어 , 발현 가능한 DNA 서열 순서 앞에 promoter가 위치하게 도와줘요.
예를들어 DNA 이중나선에서 한나선은 코드가닥 다른한가닥은 템플레이트 (주형가닥)이라고 가정하면
코드가닥를 연장개시할 상보적 Primer의 5' 염기 앞에는 EcoR1 의 인식서열, 그리고 템플레이트에 상보적 Primer앞에는 BamH1 인식서열을 첨가하여 증식한 DNA 이중나선은 앞쪽에는 BamH1 인식서열 뒤쪽에는 EcoR1인식서열을 가지게 되겠죠.
제 설명이 도움이 되셨으면 좋겠네요.:)
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