전기영동시 DNA 절편 크기에 관한 질문
제한효소로 DNA 절단 실험을 했는데요
전기영동 gel의 각 lane에 나타난 DNA 절편의 크기 합은 항상 동일해야 하는 거잖아요
어쨌든 같은 plasmid를 이용해서 실험한거니까요..
근데 그게 실제로 동일하지 않을 경우가 있다고 하고 그 이유를 알아오라는데..
그 이유가 뭐죠? 왜 달라지는 거에요?
익명 작성일 - plasmid의 상태에 따라서 조금씩 다릅니다.
일반적으로 plasind가 supercoiled인 상태에서 가장 빨리 내려가고
그다음으로 linear한거 마지막으로 circural한 순서로 loading이 됩니다.
익명 작성일 - 윗분이 말씀하시는것은 plasmid DNA를 제한효소로 자르지 않고
bacteria에서 추출후 바로 전기영동했을 경우에만 해당되는 얘기가 아닐까요? 그쵸? 음...
어쨌든 그 오랜시간동안 DNA를 만졌던(?) 저로서도 어떤 경우에 그 합!!!이 달라지는지 정말 궁금합니다. 그런 경우가 있다나요? 음.... 아님 질문을 전혀!! 파악하지 못한건가??? 음...
보통 제한효소라 자르고 나서 바로 전기영동할 경우는 제한효소 용액 (reaction buffer)에 있는 salt때문에 원래의 size와 약간은... gel %에 따라 가끔 아주 크게... 다르게 전개할 수 있답니다. 그것도 크기를 비교할 수 있는 size marker가 보통 salt가 없는 용액이나 물에 있는 상태라면 전개 속도가 당연히(?) 달라지겠죠? 그래서 간혹 아주 깐깐하신 분들은 이럴 경우 size marker에 reaction buffer를 조금 섞는 분들도 보긴 했지만... 저는 그냥 걸어요... ^^:::: 뭐 대충 비슷하게 나와면 되지 않을까 싶어서... 그래도 여태까지 큰 문제 없었답니다... sequencing으로 확인해도 잘못된 경우는 없었느니까요...
이런게 아니라면 저도 그런 경우를 알고 싶습니다. 한 수 배우고 싶네요...
... 했는데요 전기영동 gel의 각 lane에 나타난 DNA 절편의 크기 합은 항상 동일해야... 아님 질문을 전혀!! 파악하지 못한건가??? 음... 보통 제한효소라 자르고 나서 바로...
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... 그럼 그 단편 3개 외의 다른 구성물질은 전기영동시... 질문중에는 잘못된 질문도 있는 듯 싶은데. 자세히... 플라스미드 DNA보다 size가 큽니다. size가 크기때문...
... 이 차이를 가지고 전기영동을 하게 되면 비슷한 크기의 DNA 절편은 비슷한 거리를 달릴수 있게 됩니다. 그래서인지 전기영동은 running이라고 표현하기도 하나...
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