CD3로 T cell 배양하는 법

제가 답변했던

http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=61827688&answerNo=1 

에서 퍼왔습니다.

참고하세요.

 

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T cell은 TCR을 통해 신호를 받으면 activation 됩니다.

 

그러나 TCR 알파나 베타 체인은 그 스스로 activation signal을 전달하지 못하고

 

TCR 주변에 있는 CD3 chain을 통해 시그날을 전달합니다. (CD3까지 합쳐서 TCR complex라고 합니다.)

 

그래서 주로 CD3 엡실론 체인에 대한 agonistic antibody를 처리해서 TCR signal을 주는 것입니다.

 

 

T cell activation에 있어서 TCR을 통해 들어오는 시그날을 주로 first signal 또는 signal 1 이라고 표현합니다.

 

그런데 이것만 가지고는 T cell이 충분히 activation 되지 못하고 apoptosis가 쉽게 일어납니다.

 

충분한 T cell activation과 proliferation을 위해서는 T cell의 CD28을 통한 costimulation signal을 받아야 하는데,

 

그래서 CD28에 대한 agonistic Ab를 처리하는 것입니다.

 

 

이러한 과정이 만약 in vivo에서 정상적으로 일어났다면 antigen presenting cell (APC),

 

그 중에서도 주로 dendritic cell (DC)에 의해 MHC molecule을 통해 TCR signal이 들어가고 (signal 1)

 

APC의 B7.1(CD80) 또는 B7.2 (CD86)을 통해서 T cell의 CD28 쪽으로 시그날이 들어가게 됩니다 (signal 2)

 

그리고 activation 된 APC가 분비하는 cytokine이 signal 3 이 되어 T cell에 전달되고,

 

이렇게 되면 T cell의 activation, proliferation, differentiation이 정상적으로 일어나게 됩니다.

 

 

 

CD3 Ab의 경우는 거의 코팅을 해서 씁니다. 반면 CD28 항체는 코팅을 하는 경우도 있고, 때로는 그냥 media에 섞어서 넣어 주는 경우도 있습니다.

 

그것은 T cell이 APC와 만나 접촉한 상태로 signal을 받아야 정상적이고 충분한 activation 이 되기 때문에,

 

그것과 유사한 조건을 만들어주기 위해서 CD3 항체를 주로 plate에 코팅을 하는 것입니다.

 

그래서 T cell과 비슷한 크기의 microbead 에 저런 CD3/CD28 항체를 코팅해서 파는 제품도 있습니다.

 

 

 

24well cell culture plate에 해도 T cell activation이 잘 되지만, 세포배양용 plate는 코팅이 썩 잘 되는 재질은 아닙니다. 

 

더 확실한 효과를 보려면 ELISA용으로 나오는 96well plate를 UV 소독 하고, 여기에 똑같은 농도로 코팅하면 단백질 흡착이 워낙에 잘되는 플레이트라서 T cell activation이 훨씬 더 강하게 일어납니다.

 

이것의 장점은 cell이 아닌 media에서 뭔가를 분석하려 할 경우 같은 96well plate니까 ELISA용 plate로 바로 옮기기 편하고,

 

시약 배지 등등 절약하면서 진정한 의미의 triplicate culture도 쉽게 할 수 있고 등등등...

 

(한 24웰에서 키워 세개로 나누어 분석하는 것은 진정한 independent triplicate가 아니지요.)

 

단점은 media 분석이 아닌 세포를 필요로 하는 경우 (세포에서 western 같은거...),

 

 96well을 일일이 떼어야 하니까 좀 귀찮습니다. 멀티채널 써도 귀찮습니다. 더구나 코팅도 잘 된지라 쎌도 좀 강하게 붙는 편입니다.

 

 

실험 잘 하셔서 좋은 결과 내세요.