항균 평가에서 CFU counting

Question

안녕하세요 비전공자인데 항균 평가를 하게되어 질문드립니다.

예를들어 MBC농도를 결정하고 Colony counting을 하기위해

각각 10배~10 7승까지 희석된 항균물질과 균을 접종하여 100ul씩 고체 배지가 있는 petri-dish에 분주하였습니다.

10배, 100배 희석까지는 colony 0개

1000배에서 12개

10000배에서 31개

100000배에서 70개가

그 이후는 셀수없이 많음

이렇게 떴다고 가정하면 유효 콜로니수는 30~300개인걸로 아는데

유효수가 아닌 나머지 수는 아예 제외하고 각각 CFU를 구해서 평균을 내면 해당 군의 CFU라고 말할수 있나요?

31x10000x10 + 70x100000x10 /2 = 해당 군의 CFU/ml 맞나요?

그렇다면 MBC농도는 1000배 희석까지 무효하니까 1000배 희석 농도에서 계산해야할지..

아니면 colony가 뜨기 시작했으니 100배 희석 농도에서 계산해야할지..

아무리 찾아도 명확한 답을 못얻어서 물어볼곳이없어서 여기에 질문올립니다ㅠㅠ

긴글 읽어주셔서 감사합니다.

Accepted Answer

생명과학 연구원입니다 ​ 희석을 하면 비례적으로 수가 떨어져야 하는데 그렇지 않은 것을 보면 ​ 아마도 균이 가라앉아 있어서 그럴 것 같습니다. 희석할때에 충분히 흔들어주고 희석해야하며 ​ 희석할때의 Volume도 1ml은 되도록 희석하여야 오차가 줄어듭니다. ​ 대학원에서 할때에는 교수님게서 100개 이내로 카운팅 될때까지 희석하라고 하셨고 ​ 희석할때 같은 시료로 희석을 반복하여 오차범위가 5%이내일때까지 익숙해지도록 연습했습니다 ​ 현재의 결과로만 보면 10000배 희석시 31개가 좋기는 한데요 ​ 100000배 희석에서는 오히려 71개로 늘어난것이 오히려 양이 너무 차이나기 때문에 ​ 재희석해서 100개 이내까지 희석하는 것이 좋습니다