원하는 insert를 얻어야 하는 데 제한 효소를 사용할 수 없는 경우??

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원하는 insert를 얻어야 하는 데 제한 효소를 사용할 수 없는 경우??

작성일 2017.07.24댓글 1건

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유전자 재조합에 관심이 많은 한 학생인데요...

보통 insert를 얻을 때 제한 효소를 사용하잖아요..

1. 원하는 part의 서열을 얻어야 하는 데 제한 효소를 사용할 수 없는 경우??

가 있을 수 있나요? 뭐 온도 때문이라던가, 제한 효소 인식 부위가 너무 많다던가..

2. 만약 그런 경우가 존재한다면, PCR을 통해 insert를 얻고, vector에는 blunt 제한효소를 사용하는 것으로 해결할 수 있나요?

익명 작성일 -

1. 원하는 part의 서열을 얻어야 하는 데 제한 효소를 사용할 수 없는 경우??

가 있을 수 있나요? 뭐 온도 때문이라던가, 제한 효소 인식 부위가 너무 많다던가..

- insert를 얻을 때 제한효소를 사용하잖아요 <-- 제한효소로 잘라서 만든다는 질문이신가요?

- 그렇다면 insert 서열에 사용할 수 있는 제한효소 서열이 아얘 없을 수도 있고, 붙이려고 하는 vector에 사용가능한 제한효소부위가 insert에 없을 수도 있죠. 아니면 insert에 너무 많아서 자르게 되면 insert가 여러조각이 된다던가.... 경우의 수는 아주 많습니다.

2. 만약 그런 경우가 존재한다면, PCR을 통해 insert를 얻고, vector에는 blunt 제한효소를 사용하는 것으로 해결할 수 있나요?

- 원하는 제한효소가 없다면 insert가 들어있는 곳에 PCR을 할때 양쪽에 제한효소부위를 붙여서 PCR을 하게되면 새로운 제한효소를 이용할 수 있습니다. vector도 만약 PCR이 가능한 크기라면 vector도 같은 제한효소 부위를 붙여서 PCR을 해버립니다. 그런다음 둘을 붙일 수도 있구요.

- 하지만 요즘에는 기술이 많이 발달해서 제한효소를 전혀 사용하지 않고도 클로닝이 가능합니다.

1) insert PCR을 함

2) vector PCR을 함

3) insert PCR한 것, vector PCR한 것을 정제해서 이것을 template로 다시 PCR을 하게되면

insert + vector가 연결된 PCR product를 얻을 수 있습니다.

이런 경우 제한효소의 제한 없이 클로닝이 가능합니다.

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질문내용을 정확하게 이해하지 못한 답변이 될 수 있습니다.

그런 경우 의견란에 조금 더 구체적으로 남겨주시면 아는데까지 말씀드리겠습니다.

하는 데 제한 효소를 사용할 수 없는...

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