FPLC(size exclusion) 그래프 해석법!

Question

DNA cloning해서 host cell에서 recombinant protein을 만드는 실험중에 있습니다.

이 그래프 사진은 Ni-NTA affinity chromatography 후에 실험조교님이 SDS-PAGE전에 더 정확한 결과 값을 얻기 위해서 FPLC(size exclusion chromatography)을 진행해서 나온 결과입니다.

F14 , F18 peak가 의미하는게 뭔가요??

Fraction 18 57.161ml가 fraction 18에서 얻은 elution volume이라고 했습니다.

F18을 이용해서 recombinant protein의 단백질 무게는 구했는데, F14는 무엇을 의미하는 지 모르겠습니다

s노랑색 선도 무엇인 지?

파란색 선은 UV / 노란색선은 cond

#fplc size exclusion chromatography #fplc size exclusion

Accepted Answer

노란색은 전기 전도, Conductivity라고 합니다. ​ 버퍼 혹은 샘플 내의 전해질의 양이라고 생각하시면 되겠습니다. 염이나 단백질 같이 전해질 양에 따라서 전기가 흐르는 정도가 달라지는데 이 때문에 발생하는 현상입니다. 다만 측정되는 위치가 다른 이유는 기계의 전도도 측정하는 위치가 출구 부분에 있어서 그렇습니다. (크게 의미를 두지 않으셔도 됩니다.) UV 는 단백질의 농도, 양입니다. ​ 전도도 보단 UV 쪽만 보셔도 크게 문제가 없습니다. ​ size exclusion는 크기가 작은 단백질은 뒤에 나오고 큰건 먼저 분리하는 기법입니다. 분리하는 시료에는 여러 크기의 단백질이 있는데, 그래프상 볼 때 14번 fraction(첫번째 peak)이 가장 큰 단백질 (정체는 저는 몰라요)이고, 두번째가 18번 fraction (두 번째 peak)이라는 말이 됩니다. 가장 작은 건 멀리 분리 되어있네요 (세번째 픽) 말씀하시는 걸보면 2번째 peak이 target인 어떤 단백질이 되겠고 1번 peak은 aggregation된 단백질이나 1차 정제 때 걸러지지 않은 단백질 등이 되겠습니다.