멜라민 검출 방법

 

일반 가정에서는 식품중에 함유된 멜라민을 검출하는 실험을 하시기는 어렵다고 생각됩니다. 왜냐하면 아주 고가(高價)의 화학분석 장비를 사용해야 하기 때문입니다.

 

주로 HPLC라고 부르는 장비를 쓰거나 아니면 GC를 사용해서 검출을 시도합니다. 정밀한 측정을 위해서 엑세서리까지 풀 셋트로 갖추려면 요즘같은 고환율 시대에는 좋은 브랜드 제품은 억대가 훌쩍 뛰어넘을 수도 있습니다.

 

HPLC나 GC에 대해서는 기기분석 책을 구해서 보시던가 아니면 인터넷으로라도 검색을 해보시면 어떤 기기(기계)인지 잘 아실 수가 있습니다.

 

아래는 미국 FDA에서 사용하는 멜라민 검출법을 번역한 것입니다. 화학쪽 전공자가 아니시거나 기기분석에 낯선 분이라면 무슨 말인지 이해하기도 어려울 수가 있습니다만... 대강을 참고하시면 되겠습니다.

 

 

                                              

 

 

- 식품 중의 멜라민(melamine) 분석법 -

 

발췌 : http://bric.postech.ac.kr/labinfo/qna/attachq/멜라민분석법[2007523135222223].pdf

 

 

 

[HPLC를 이용한 멜라민 분석]

 

(1) 표준품 제조

□ 표준용액의 제조

○ stock 표준품은 혼합용매(아세토니트릴:물(76:24))로 제조한다.
○ 측정용 stock 표준품은 혼합용매(아세토니트릴:물(60:40))로 제조한다.
○ 희석은 모두 물이나 0.1N HCl로 한다.

□ 정량곡선 작성
○ linear range는 1.0~400㎍/㎖에서 얻을수 있으나 정량곡선은 1.0-200㎍/㎖로 조정하여 작성한다.
○ 재현성은 0.1~5% 이어야 한다.
○ 회수율은 90~110%이어야 한다.

 

(2) 시료 전처리

□ 시료를 잘게 분쇄하여(0.5mm이하) 0.1g~2.5g을 취하여 scintillation 처리한 바이얼에 넣어 추출용매(아세토니트릴:물(50:50))를 10ml 넣어 뚜껑을 닫고 격렬하게 흔든 다음 30분 동안 초음파 추출한다. (2% 이상의 멜라민 함유시료의 경우 0.05g 당 15ml 추출용매 사용)
□ GMF-Nylon(0.45mm) 필터를 이용하여 여과한 다음 추출용매 250㎕를 물 또는 0.1N HCl 750㎕로 희석한다.

 

(3) 기기분석

 

□ HPLC/UVD에 의한 정량
- 컬럼 : Zobax Rx C8 또는 이와 동등한 것
- 이동상 : 완충용액1 :아세토니트릴(85:15) (1완충용액 : 10mM citric acid 및 10mM sodium octane sulfonate를 pH 3.0으로 맞춘 것)
- 유속 : 1 ㎖/min.
- 주입량 10㎕
- 칼럼 온도 : 40℃
- 검출파장 : 240 ㎚
- Retention time : 4.2~4.3 min
- Run time : 10 min

 

참고문헌
미국 FDA : http://www.fda.gov/cvm/melamine04022007.htm

 

 

 

[GC/MSD를 이용한 멜라민의 확인]

 

(1) 시료 전처리

□ 시료 약 0.5g을 scintillation vial에 옮겨 메탄올 5ml를 넣는다.
□ 시료 균질화를 위해 vortex한 다음 10분간 초음파 추출한다.
□ 약 6분 동안 4500rpm에서 원심분리한 다음 nylon filter disc(0.45 ㎛)를 이용하여 여과한 다음 GC 바이얼에 옮긴다.

 

(2) 유도체화

□ 바탕시험용 시료 제조
○ 시료추출에 사용한 메탄올 40㎕를 취하여 바이얼에 넣는다.
○ 약 70℃에서 건조공기를 이용하여 농축한다.
○ 피리딘 200㎕와 BSTFA 200㎕를 넣어 70℃에서 30분간 방치한다.

□ 표준시료 조제
○ 표준시료의 농도가 100㎍/㎖ 이하가 되도록 희석한다.
○ 적당량의 표준용액을 바이얼에 넣어 바탕시험용 시료 제조와 동일하게 제조

□ 분석시료 조제
○ 메탄올 추출액 40㎕를 바이얼에 넣고 바탕시험용 시료 제조와 동일하게 제조

 

(3) 기기분석

□ GC/MSD에 의한 기기분석
○ Gas Chromatography
- 칼럼 : J&W DB-5MS(0.25㎜ × 0.25 ㎛ × 30m)또는 이와 동등한 것
- carrier gas : 헬륨
- 유속 : 1.3 ㎖/min.
- 주입방법: splitless or split(1:20)
- 주입량 : 1㎕
- 주입구온도 : 250 ℃
- purge flow : 10.0 ㎖l/min. at 2.0 min.
- 오븐온도 : 75·℃(1.0min)→30㎕/min→300℃(2.0min.)
- Transfer line 온도 : 280℃
- Run time : 10.5 min.
○ Mass spectrometry
- Mass range : 40~450 amu
- Scan mode : full
- filament delay : 4.2 min(splitless), 3.8min(split)
- MS Quad : 150℃
- MS source : 230℃

 

(4) 멜라민 확인

□ 확인 이온
m/z = 342, 327, 171, 99, 73

 

 

참고문헌
미국 FDA : http://www.fda.gov/cvm/MelaminePresence.htm

 

 

 

도움이 되셨길 빕니다.