PCR 원리 질문합니다!

안녕하세요 :) PCR의 원리 질문하셨습니다.

질문에 도움이 되셨다면 답변 답변확정 부탁드립니다 ^^

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우선 PCR의 정의를 먼저 살펴보도록 하겠습니다.

PCR은 즉 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reation)이며 특정 부위의 DNA를 시험관내에서 특이적으로 반복 합성하여 대량 증폭시키는 기술중에 하나입니다.

더 쉽게 설명하자면 미량의 DNA로부터 어떤 특정영역의 DNA를 단시간내로 증폭시키는 기술이라는 뜻이기도 합니다.

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그렇다면 PCR 과정을 한번 살펴볼까요?

크게 과정은 변성(denaturation)-프라이머와 단일사슬 DNA의 결합(annealing)-DNA중합효소에 의해 DNA를 신장(Extension)이렇게 이루어집니다.

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각각 소요시간은 다음과 같은데

1단계 변성에서는 이중사슬 DNA는 90-94도의 온도에서 30초~1분간 가열하여 단일사슬 DNA로 분리시키는 작업을 합니다.

그런데 주의사항은 첫 이중사슬 DNA에서 단일사슬DNA로 분리 시에는 반응시간을 5분간 주어야 확실한 변성이 됩니다.이점 유의하시길 바랍니다.

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2단계 어닐링 단계에서는 온도가 반응의 특이성에 영향을 미칩니다.그리고 일반적으로 55~60도 온도에서 30초~1분간 가열합니다.즉 소요시간은 30초~1분 정도입니다.

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3단계 신장에서는 Taq DNA 중합효소에 의해 주형 DNA에 붙은 프라이머를 기점으로 해서 DNA가 합성되어 Extension되는 과정으로 70~74도 온도에서 30초에서 1분간 가열하는데 반응시간은 산물의 크기에 다릅니다.

마지막 회의 연장시간은 PCR 산물의 충분한 중합반응을 위해 5~10분간의 시간을 주게 됩니다.

결론.Taq. Polymerase에 의한 DNA 합성속도(약 60 nucleotides/sec, 70℃)를 고려하여 시간을 설정하게 됩니다.예를 들어 1시간이면 1시간입니다.

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관련 자료는 밑의 링크를 참고하시면 좋겠습니다.

http://local.koreasci.com/download/manual/Edvotek/EDS48.pdf

https://m.blog.naver.com/PostView.naver?isHttpsRedirect=true&blogId=genetic2002&logNo=30000540271

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PCR의 3단계 중합효소연쇄반응(PCR)은 시험관 내에서 DNA분자의 특정 염기 서열을 선택적으로 증...

m.blog.naver.com

https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=news&id=322351

[생명과학자 기초체력 다지기] #2_PCR

“생명 과학자 기초 체력 다지기” 두 번째 주제는 우리에게 너무나 친숙한, 하지만 10년차 점수으로도 단번에 성공하기 쉽지 않은 “PCR”에 대해 알아 보고자 한다. PCR (Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응), 지금은 생명과학 연구자라면 누구나 경험이 있을 정도로 흔한 기술이 되었지만, 특정 유전자의 클론을 제작하고 재조합 단백질을 생산하기 위해 필수적인 기술로, 오늘날 생명공학의 비약적인 발전을 견인한 핵심 기술이다.  

www.ibric.org

도움이 되셨을지 모르겠습니다.감사합니다.

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출처 : 분자생물학 유전체와 단백질체의 구조와 동력학 (라이프 사이언스),임상분자생물학(JMK),조직검사학 제5판(고려의학),한국과학 PCR의 효과 학습(기본)